熒光強度容易受外界因素的影響，如樣品池、激發光源、溫度、溶液的pH值、溶劑性質、其它溶質、表面活性劑等都會造成熒光強度的變化。嚴格控制測試條件對熒光分析來說至關重要。
①樣品應盛在四面透光的石英比色皿（熒光池）中，如果是揮發性樣品應使用帶塞的熒光池。
②在熒光分析時，為了得到穩定可靠的數據，一般需要開機預熱氙燈大約30min。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈，預熱時間可以縮短到10min左右。對某些易感光、易分解的熒光物質，盡量采用長波長、低人射光強度及短時間光照。
③溫度變化可引起熒光強度的改變。通常降低溫度，有利于提高熒光量子產率，熒光強度增大。溫度影響熒光強度的顯著程度因樣品而異，大部分熒光物質的熒光強度受溫度影響不大，測試溫度變化不超過±3℃，對測試結果幾乎無影響。
④當熒光物質是弱酸或弱堿時，溶液的pH對熒光強度有較大影響。因為弱酸或弱堿在不同酸度中，分子和離子的電離平衡會發生改變，而熒光物質的熒光強度會因其離解狀態發生改變。以苯胺為例：在pH=7～12的溶液中會產生藍色熒光，在pH<2或ph>13的溶液中都不產生熒光。再如，維生素B2（核黃素）在430～440nm藍光照射下會發出綠色熒光，λem為535nm。它在pH=6～7的溶液中熒光強度大，而在pH=11時熒光消失；但在堿性溶液經光線照射發生分解作用或在酸性KMn04氧化下都會生成熒光強度比維生素B2強得多的黃光素，并可溶于。利用此性質可提高測定的靈敏度和選擇性。
⑤分子結構中存在π-π共軛的熒光物質在極性溶劑中，熒光效率顯著增強。溶液中表面活性劑的加入能夠顯著提高熒光強度。
