熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發光譜、發射光譜以及熒光強度、量子產率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數，從各個角度反映了分子的成鍵和結構情況。通過對這些參數的測定，不但可以做一般的定量分析,而且還可以推斷分子在各種環境下的構象變化，從而闡明分子結構與功能之間的關系。熒光分光光度計的激發波長掃描范圍一般是190~650nm，發射波長掃描范圍是200~800nm。可用于液體、固體樣品（如凝膠條）的光譜掃描。
熒光強度跟很多因素有關，如分子結構、存在狀態、溶液濃度或薄膜厚度、溫度、選擇的激發波長、測試狹縫寬度等因素。熒光強度在不同儀器上的測量值存在較大差異，不具有可比性，但是其峰位還是較容易確定的，可以用來判斷何種物質。進行熒光定量分析，必須固定一些條件。
狹縫的大小對熒光強度很重要，狹縫大小可根據你所測物質的熒光強度大小作出適當的調整。在同一濃度，如熒光強度過大，超過儀器量程，可減小狹縫。但是，需要指出的是，不能僅憑狹縫的大小來改變熒光強度，還要考慮分辨率的問題。對于熒光掃描而言，狹縫加大可以使熒光強度提高同時重現性得到提高，但是分辨率隨之降低。狹縫決定分辨率，儀器其它結構已經固定(光柵的刻線數、焦距以及綜合的線色散系數)，狹縫大小就決定分辨率的高低。對于實際使用，狹縫大小需要和測定的峰的半峰寬相匹配，過大，峰就變形了。狹縫大小也決定了光通量大小。按照經驗數值，狹縫開大1倍，光通量將增大4倍。
